油茶籽饼粕中甲醇提取物抑制黄曲霉菌效果及成(5)

3 讨 论

植物材料中活性成分的成功预测在很大程度上取决于提取过程中所用溶剂的种类，传统上许多活性成分是用水作为溶剂进行提取的，但甲醇和乙醇提取物显示出更强的效果[23]，大多数活性成分在有机溶剂中的溶解度要优于非有机溶剂[24]。本研究采用甲醇提取脱脂油茶籽饼，这是由于抑菌活性成分在80%甲醇溶剂中有更好的溶解性，而这些成分在水和其他溶剂中的不能被充分溶解[25]。

由于植物中的化学成分极其复杂，在提取活性成分时，仅用某一种溶剂有时候不可能将植物的活性组分都提取出来，因此有必要采用极性不同的几种溶剂对同一植物进行提取，使得各成分依其在不同溶剂中的溶解度差异而分离出来，从而避免最强活性物质的漏筛。本研究采用80%甲醇、乙酸乙酯、正丁醇依次对油茶籽粕进行梯度萃取，研究结果发现，甲醇和正丁醇萃取物的抑菌效果具有明显的剂量依赖效应，即浓度越大，抑菌效果越好，这一发现与前人的研究结果一致[26-27]。不同萃取相中，正丁醇的提取效率最高，萃取物抑菌效果最好，可见其中包含了更多的活性物质，有效干扰和破坏了黄曲霉菌菌丝的正常生长，这可能是由于正丁醇萃取物使得黄曲霉的细胞壁和细胞膜受到损伤，细胞生长受阻，菌丝衰败，从而导致了菌丝质量显著减少[28]。

自然界产生的黄曲霉毒素主要包括AFB1、AFG1、AFB2和AFG2（按照毒性由高到低的顺序），黄曲霉菌可产生B类毒素，寄生曲霉菌可产生B类和G类毒素[29]。其中AFB1最常被检出，也是目前已知致癌性最强的天然毒素，AFM1、AFG1次之，AFB2、AFG2较弱[30,11]。在本研究中，所有样品均未检出AFB2，仅有AFB1被检出，这与之前的研究结果一致[15]。AFB1是目前已知最强的致癌性化学物之一，被FAO和WHO列为I级致癌物，是诱发恶性肿瘤原发性肝细胞癌的主要因素之一。

适于真菌生长的培养基有马铃薯葡萄糖琼脂培养基、沙氏培养基、察氏培养基、麦芽汁琼脂培养基、酵母浸膏蔗糖培养基等，黄曲霉毒素的产生需要一定的条件，影响黄曲霉毒素合成的因素很多，如菌种、碳源、温度、空气、湿度等因素[31]。马群飞[32]、庄振宏[33]等对不同培养基对比研究发现，与其他培养基质相比，大米培养基更有利于AFB1的产生。也有研究认为，YES培养基可以较好地诱导黄曲霉菌的产毒[34-35]。本研究中使用的培养基为PDA和PDB培养基，试验结果显示AFB1的产量普遍偏低，分析其原因可能与所选择使用的培养基种类有关，也有可能是所选用的黄曲霉菌种本身的产毒能力偏低。

油茶籽粕正丁醇提取物中的主要化学成分是茶皂素[21-22]。茶皂素除具有发泡、乳化、去污、洗涤等用途外，还具有多种生理活性和生理功能，对一些病原菌有较好的抑制效果，如酵母（Saccharomyces sp.），黑曲霉（Aspergillus niger），青霉（Penicillium citrinum），大肠杆菌（Escherichia coli.），产朊假丝酵母（Candida utilis），蕈状芽孢杆菌（Staphylococcus aureus），白色念珠菌（Monilia albicans）和枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）[36-42]。然而，茶皂素对于黄曲霉菌抑制作用的研究还未见报道。本研究中正丁醇萃取物对黄曲霉菌的生长和产毒有明显的拮抗效果，而茶皂素对黄曲霉菌的生长无抑制效果，可见油茶籽粕正丁醇萃取物中对黄曲霉菌起抑制作用的不是茶皂素，而是茶皂素以外的其他活性成分。这为开发为可以广泛用于食品、医药等领域的植物源抑菌剂提供了良好的理论基础，也为油茶籽饼粕的开发利用提供了更好的途径，提高了油茶副产物利用水平。

4 结 论

本研究发现，油茶籽饼80%甲醇提取液的正丁醇萃取物对黄曲霉菌的生长和产毒有明显的拮抗效果，且随浓度增大抑菌效果增强，100 mg/mL时抑菌圈直径达22.00 mm，菌丝干质量相比对照减少了42.88%，黄曲霉毒素未被检出。对正丁醇萃取物进一步纯化鉴定，确定抑菌活性成分为3种黄酮苷类化合物：山奈酚-3-O-[β-D-吡喃葡萄糖苷-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→6)-O-β-D-吡喃半乳糖苷]，山奈酚-3-O-[2-O-β-D-吡喃木糖基-6-O-α-L-吡喃鼠李糖]-β-D-吡喃葡萄糖苷，山奈酚-3-O-(6-反式-对-香豆酰基）-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→3)-O-α-L-吡喃鼠李糖-(1→6)-O-β-D-吡喃半乳糖苷。

王亚萍，费学谦，陆宽宽，姚小华，郭少海，王开良. 油茶籽饼粕中甲醇提取物抑制黄曲霉菌效果及成分分析[J]. 农业工程学报，2019，35(11)：322－329. doi：10./

Wang Yaping, Fei Xueqian, Lu Kuankuan, Yao Xiaohua, Guo Shaohai, Wang Kailiang. Inhibitory effect of Aspergillus flavus and component analysis of methanol extraction from camellia seed cake[J]. Transactions of the Chinese Society of Agricultural Engineering (Transactions of the CSAE), 2019, 35(11): 322－329. (in Chinese with English abstract) doi：10./

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