农作物论文_黄麻内参基因筛选及次生细胞壁合成 -种子科技杂志社投稿

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农作物论文_黄麻内参基因筛选及次生细胞壁合成

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文章摘要:选择合适的内参基因进行校正和标准化，既能提高实时定量荧光PCR的准确性，也为分析黄麻次生细胞壁合成相关基因的表达模式奠定基础。本研究通过常用的内参基因，结合课题组已有的基因组数据和转录组数据，初步筛选出8个内参基因（CcTUBα、CcACT、CcDnaJ、CcTUBβ、CcUBQ、CcEF1α、CcUBC和CcUBI）。为验证这些候选内参基因的稳定性，以优良品种‘黄麻179’为材料，对种子萌发后14 d的根、茎、叶进行qRT-PCR分析。经Ct值的变异系数、软件geNorm和NormFinder的综合分析，确定表达最稳定内参基因为CcDnaJ，最佳内参基因组合方式为CcDnaJ+CcUBQ+CcUBI。通过种子萌发后10 d下胚轴、60 d和90 d茎皮的转录组数据分析次生细胞壁合成相关基因的表达模式，发现木质素合成基因Cc4CL1、CcCCoAOMT1的表达量在种子萌发后60 d茎皮最高，而种子萌发后90 d茎皮表现为下降；纤维素合成酶基因CcCesA4、CcCesA7、CcesA8和木聚糖合成基因CcIRX8、CcIRX9、CcFRA8的表达量在种子萌发后10 d下胚轴最高，而种子萌发后60 d、90 d茎皮的表达量均有下降，表明这些基因参与了黄麻纤维发育。以CcDnaJ+CcUBQ+CcUBI作为内参基因组合，qRT-PCR分析5个次生细胞壁合成相关基因，即Cc4CL1、CcCCoAOMT1、CcCesA4、CcCesA7、CcesA8，在种子萌发后7 d下胚轴和14 d茎的表达模式，发现这5个基因在种子萌发期后14 d茎的表达量均高于种子萌发期后7 d下胚轴，暗示着黄麻纤维的形成开始于7～14 d之间，同时表明CcDnaJ+CcUBQ+CcUBI的内参基因组合具有实用性。

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