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HPLC 法同时测定新会柑种子中7 种成分
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摘要：陈皮为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮, 作为药食同源的材料, 主要包括广陈皮、 川陈皮、 浙陈皮、 建陈皮和赣陈皮。 其中广陈皮为茶枝柑Citrus reticulata ‘Chachi’ （新会柑
陈皮为芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮, 作为药食同源的材料, 主要包括广陈皮、 川陈皮、 浙陈皮、 建陈皮和赣陈皮。 其中广陈皮为茶枝柑Citrus reticulata ‘Chachi’ （新会柑或大红柑）的干燥成熟果皮[1], 主产于江门市新会地区, 为广东省十大道地药材之一, 也是首批立法保护的8种岭南中药材之一, 具有理气健脾、 和胃止呕、 燥湿化痰等功效[2]。
广陈皮产业发展迅速, 仅新会当地统计, 2017年广陈皮的种植规模已达7 万亩, 总产柑果超8.5万吨, 扣除果皮后果肉年产近6 万吨, 果籽近2 000吨。 尽管果肉与果籽产量极大, 但对新会柑的应用主要集中于果皮。 由于其柑肉味酸籽多, 故其果肉和果籽的处理方式通常为挖土掩埋或是直接扔入沟渠等露天场所, 不仅造成了极大的资源浪费, 也对环境造成了污染。
将柑橘果籽（种子） 作为中药橘核Citrus reticulata Semen 应用, 其具有理气、 散结、 止痛等功效[3]。 现代药理研究表明, 橘核还具有镇痛、 抗癌以及抗感染等药理活性[4]。 课题组对新会柑果皮（广陈皮） 的化学成分、 药理活性以及质量控制等已作了大量研究[5-8], 但国内外尚无新会柑果籽（种子） 的相关研究报道。 因此, 为了更好地开发利用新会柑, 本研究首次建立了HPLC 法同时测定新会柑种子中7 种成分, 以期为其资源的合理开发应用提供科学依据。
1 材料
Shimadzu LC-20AT 高效液相色谱仪（日本岛津公司）； UV 2300 紫外-可见分光光度计（上海天美科学仪器有限公司）； MS205DU 分析天平（十万分之一, 瑞士梅特勒-托利多公司）； 超声波清洗机KQ-800KDE （昆山市超声仪器有限公司）。
新会柑柑果采至广东省江门市新会区, 由广州医科大学药学院蔡轶副教授鉴定为芸香科柑橘属茶枝柑Citrus reticulata ‘Chachi’ 的果实, 经剥离果皮, 收集种子, 洗净、 晒干得干燥成熟种子, 其样品保存于广州医科大学药学院生药学实验室。 信息见表1。
表1 样品信息Tab.1 Information of samplesimages/BZ_129_1284_1316_2242_1366.pngS1 茶枝柑 广东江门新会区会城街道南坦村 2017.10 S2 茶枝柑 广东江门新会区会城街道天马村 2017.12 S3 茶枝柑 广东江门新会区双水镇衙门村 2017.11 S4 茶枝柑 广东江门新会区三江镇深吕村 2017.10
辛弗林 （批号MUST-）、 没食子酸（批号MUST-）、 橙皮苷 （批号 MUST-）、 柠檬苦素 （批号MUST-）、川陈皮素（批号MUST-）、 橘皮素（批号MUST-, 含有量≥98%） 均购于成都曼思特生物科技有限公司； 3, 5, 6, 7, 8, 3′, 4′-七甲氧基黄酮（批号, 含有量≥98%, 四川维克奇生物科技有限公司）。 乙腈（色谱纯, 含有量≥98%美国霍尼韦尔公司）； 甲醇、 乙酸乙酯均为分析纯； 水为怡宝纯净水。
2方法与结果
2.1 HPLC 法测定7 种成分含有量
2.1.1 供试品溶液 分别称取4 批新会柑种子适量, 打粉, 粉末过3 号筛, 精密称取粉末0.2 g 于100 mL 锥形瓶中, 加入20 mL 甲醇, 超声提取（320 W、 40 kHz） 30 min, 过滤, 即得。
2.1.2 对照品溶液 精密称取一定量的7 种对照品至50 mL 量瓶中, 加甲醇溶解并定容, 使制成质量浓度分别为辛弗林37.560 μg/mL、 没食子酸1.200 μg/mL、 橙皮苷341.700 μg/mL、 柠檬苦素392.980 μg/mL、 川陈皮素71.040 μg/mL、 3, 5,6, 7, 8, 3′, 4′-七甲氧基黄酮9.960 μg/mL 和橘皮素49.320 μg/mL 的混合对照品贮备液, 冰箱4 ℃保存备用。 临用前, 加甲醇稀释至适宜浓度, 即得 色谱条件 DIKMA Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）； 流动相磷酸水（A） -（甲醇∶乙腈=1 ∶1, B）, 梯度洗脱, 程序见表2；检测波长辛弗林（224 nm）, 没食子酸（218 nm）,橙皮苷（283 nm）, 柠檬苦素（209 nm）, 川陈皮素、 3, 5, 6, 7, 8, 3′, 4′-七甲氧基黄酮、 橘皮素（330 nm）； 柱温30 ℃； 体积流量1.0 mL/min；进样量10 μL。 色谱图见图1。
表2 梯度洗脱程序Tab.2 Gradient elution programsimages/BZ_130_236_976_1194_1025.png0～5 95～95 5～5 5～10 95～45 5～55 10～15 45～40 55～60 15～20 40～35 60～65 20～25 35～25 65～75 25～30 25～20 75～80 30～35 20～15 80～85 35～40 15～5 85～95
图1 各成分HPLC 色谱图Fig.1 HPLC chromatograms of various constituents1. 辛弗林 2. 没食子酸 3. 橙皮苷 4. 柠檬苦素 5. 川陈皮素 6. 3, 5, 6, 7, 8, 3′, 4′-七甲氧基黄酮 7. 橘皮素1. synephrine 2. gallic acid 3. hesperidin 4. limonin 5. nobiletin 6. 3, 5, 6, 7, 8, 3′, 4′-heptamethoxy flavonoids 7. tangeretin
2.1.4 波长选择 分别精密称取一定量7 种对照品于量瓶中, 加入甲醇溶解并定容, 备用。 以甲醇为空白对照溶液, 在190～900 nm 波长范围内进行扫描, 以对照品溶液和供试品溶液均有较大吸收为指标选择测定波长, 最终7 种成分的检测波长分别确定为辛弗林（224 nm）, 没食子酸（218 nm）,橙皮苷（283 nm）, 柠檬苦素（209 nm） 和川陈皮素、 3, 5, 6, 7, 8, 3′, 4′-七甲氧基黄酮、 橘皮素（330 nm）。
文章来源：《种子科技》 网址: http://www.zzkjzz.cn/qikandaodu/2021/0112/797.html