波棱瓜子木脂素纳米混悬剂的制备

目前，约有40%化学实体（单体化合物）存在难溶问题，在天然产物中更常见［1-2］，使得本来有价值的活性成分容易被抛弃或忽视，也是导致中药越分越细、越分越无效的重要原因之一。纳米混悬剂是采用少量表面活性剂或聚合物稳定的“纯药物”颗粒所构成的一种亚微米胶体分散体系［3］，可显著增加药物溶出和吸收，提高其生物利用度［4-5］。

波棱瓜子是葫芦科波棱瓜子属植物波棱瓜Herpetospermum caudigerumWall.的干燥成熟种子，为藏医治疗肝病的常用药物之一［6-7］，具有明显的抗乙肝病毒活性，尤其是HBeAg 血清学转换率较高，临床价值和应用前景良好［8-9］。课题组前期从波棱瓜子中分离得到了4 种木脂素，即波棱甲素、波棱酮、波棱内酯A、波棱素，但富集该类单体成分的量非常有限，常规方法制备纳米混悬剂所需原料药较多，故本实验采用微量介质研磨法制备。而且，前期以槲皮素、黄芩苷、葛根素、水飞蓟素等为模型药验证该方法的可行性［10］，发现它能成功制备纳米混悬剂，而且原料药消耗少，工艺简单，操作方便，为本实验打下了良好的基础，也为进一步发现波棱瓜子中抗乙肝病毒活性成分奠定基础。

1 材料

DF101S 集热式恒温加热磁力搅拌器（北京恒丰长伟科技有限公司）；Winner 802 纳米激光粒度仪（济南微纳颗粒仪器股份有限公司）；S-4800 扫描电镜（日本日立公司）；ZRS-8G 智能溶出试验仪（天津市天大天发科技有限公司）；LC-20A 高效液相色谱系统（日本岛津公司）。氧化锆珠子（直径0.4～0.6 mm）购于长沙华尊陶瓷材料有限公司。波棱甲素、波棱酮、波棱内酯A、波棱素原料药（自制，含有量均在85%以上）。聚维酮K30由安徽山河药用辅料股份有限公司馈赠；十二烷基硫酸钠购于天津市光复精细化工研究所。

2 方法与结果

2.1 稳定剂溶液制备［11］称取12.0 mg 聚维酮K30、9.0 mg 十二烷基硫酸钠，置于50 mL EP 管中，加入30 mL 蒸馏水摇匀，作为含稳定剂的溶液A，用于制备波棱甲素、波棱酮、波棱内酯A 纳米混悬剂；称取聚维酮K30 24.0 mg、十二烷基硫酸钠18.0 mg，置于50 mL EP 管中，加入30 mL 蒸馏水摇匀，作为为含稳定剂的溶液B，用于制备波棱素纳米混悬剂。

2.2 纳米混悬剂制备 称取波棱甲素、波棱酮、波棱内酯A 各6.0 mg，波棱素12.0 mg，置于10 mL西林瓶中，加入3.0 mL 稳定剂溶液及适量磁力搅拌子、氧化锆珠子，冰水浴中以一定速度研磨一段时间，即得。

2.3 粒径分布、稳定系数测定 适量纳米混悬剂用蒸馏水稀释，粒度仪测定其平均粒径和多分散指数，重复3 次，取平均值。另取适量纳米混悬剂，于1 500 r／min 转速下离心30 min［12］，测定上层混悬液平均粒径，重复3 次，取平均值，计算稳定系数，公式为稳定系数=离心后上层混悬液的平均粒径／离心前的平均粒径。

2.4 工艺参数优化 固定波棱甲素、波棱酮、波棱内酯A 纳米混悬剂处方中药物浓度为0.2%，稳定剂溶液A 用量均为3.0 mL；波棱素纳米混悬剂处方中药物浓度为0.4%，稳定剂溶液B 用量为3.0 mL。以平均粒径、多分散指数、稳定系数为指标，考察研磨速度、研磨介质用量、研磨时间对平均粒径、多分散指数、稳定系数的影响。

2.4.1 研磨速度 固定研磨时间1.0 h、氧化锆珠用量3.0 mL，考察不同研磨速度，结果见表1。由表可知，随着研磨速度增加，波棱甲素纳米混悬剂平均粒径先增加后降低，但在600、800 r／min 时差异不明显，波棱酮、波棱素纳米混悬剂均无明显差异，波棱内酯A 纳米混悬剂先降低后趋于不变；波棱甲素纳米混悬剂多分散指数逐渐减小，但在600、800 r／min 时无明显差异，波棱酮、波棱素纳米混悬剂无明显差异，波棱内酯A 纳米混悬剂先减小后增加；波棱甲素、波棱素纳米混悬剂稳定系数先变大后变小，波棱酮、波棱内酯A 纳米混悬剂逐渐增加，但在800、1 000 r／min 时波棱酮、波棱素纳米混悬剂无明显差异。综合考虑，最终确定波棱甲素、波棱酮、波棱内酯A 纳米混悬剂研磨速度均为1 000 r／min，波棱素纳米混悬剂为800 r／min。

表1 研磨速度对平均粒径、多分散指数、稳定系数的影响（±s，n=3）Tab.1 Effects of milling speed on average particle size，polydispersibility index and stability coefficient（±s，n=3）注：与800 r／min 比较，?P＜0.05

2.4.2 研磨介质用量 固定研磨时间1.0 h，波棱甲素、波棱酮、波棱内酯A 纳米混悬剂研磨速度均为1 000 r／min，波棱素纳米混悬剂为800 r／min，考察不同研磨介质用量，结果见表2。由表可知，随着研磨介质用量增加，波棱甲素纳米混悬剂平均粒径逐渐增加，波棱酮、波棱素纳米混悬剂先减小后趋于不变，波棱内酯A 纳米混悬剂先变大后减小，但在3.0、4.0 mL 时波棱甲素、波棱内酯A纳米混悬剂无明显差异；波棱甲素、波棱素纳米混悬剂多分散指数均无明显差异，波棱酮纳米混悬剂先变大后变小，但在4.0、5.0 mL 时无明显差异，波棱内酯A 纳米混悬剂先不变后减小。综合考虑，最终确定波棱甲素、波棱素纳米混悬剂介质用量为4.0 mL，波棱酮、波棱内酯A 纳米混悬剂为5.0 mL。

文章来源：《种子科技》 网址: http://www.zzkjzz.cn/qikandaodu/2021/0112/796.html